一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法-尊龙凯时官方app下载

文档序号:36175345发布日期:2023-11-25 00:14阅读:40来源:国知局
一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法

1.本发明涉及组织培养技术领域,尤其涉及一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法



背景技术:

2.植物组织培养是在人为创造的无菌条件下将活的离体器官
(
如根





茎段和原生质体等
)、
组织或细胞置于培养基内,并放在适宜的环境中,进行连续培养以获得细胞

组织或个体的技术,这种技术已广泛应用于农业

生物和医药的研究

植物组织培养利用的是细胞全能性,是指已经分化的细胞,仍然具有发育成完整生物体的潜能

每个植物细胞里都含有一整套遗传物质,但只会在特定条件下才会表达

组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化,诱导形成愈伤组织,再在愈伤组织上诱导形成新的丛生芽

3.对植物茎段

叶片进行切割时,需要多次交换双手使用镊子

剪刀和解剖刀进行操作,在此过程容易造成污染;同时由于培养瓶口的限制,不便于将植物材料放入培养基中的指定位置;此外,样品和镊子接触时不容易掌握力道很可能破坏样品组织,引起植物发育不良

使用组培袋进行培养有利于节省空间并且袋口较大利于苗的放置,但存在的问题是组培袋的植株污染率较高



技术实现要素:

4.本发明的目的在于提供一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法,降低由于使用组培袋作为生根培养容器引发的植株污染率高的问题

5.为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
6.本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法,包括如下步骤:
7.(1)
选取秋石斛萌芽的茎尖作为外植体,接种到丛生芽诱导培养基中,进行诱导培养,得到秋石斛丛生芽;
8.(2)
将所述秋石斛丛生芽分割后,接种到丛生芽增殖培养基中,进行增殖培养,得到秋石斛壮苗;
9.(3)
将所述秋石斛壮苗分割后,接种到装有生根培养基的组培袋中,进行生根培养,得到秋石斛完整植株,所述生根培养基装入组培袋后使用刮板进行整理,使粘附于组培袋侧壁上的生根培养基聚集到底部;
10.所述生根培养基的组成为:
1/2ms
土豆粉
15

20g/l
成熟西红柿汁4~
6ml/l
花宝一号
0.8

1.2g/l
活性炭
0.3

0.7g/l naa4

6mg/l
蔗糖8~
12g/l
卡拉胶5~
7g/l。
11.优选的,所述丛生芽诱导培养基的组成为:
ms 6-ba2.0

4.0mg/l naa0.1

0.3mg/l ga30.3

0.5mg/l
蔗糖
25

35g/l
琼脂粉5~
6g/l。
12.优选的,所述诱导培养的条件为:
23

27℃
下培养
18

22d
,每天
14

16h
光照,8~
10h
黑暗,光照强度为
1500

2000lx。
13.优选的,所述丛生芽增殖培养基的组成为:
ms 6-ba1.0

3.0mg/l naa0.08

0.12mg/l
蔗糖
25

35g/l
琼脂5~
7g/l。
14.优选的,所述增殖培养的条件为:
23

27℃
下培养
30

35d
,每天
14

16h
光照,8~
10h
黑暗,光照强度为
1500

2000lx。
15.优选的,所述增殖培养后还进行一次继代培养,获得秋石斛壮苗

16.优选的,所述生根培养的条件为:
23

27℃
下培养
50

60d
后,每天
12

13h
光照,
11

12h
黑暗,光照强度为
1500

1800lx。
17.本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法,并提供了一种适合组培袋培养的生根培养基,本发明通过在生根培养基中添加成熟西红柿汁大大降低了秋石斛植株的污染率,且通过优化生根培养基的成分和用量提高了秋石斛植株的生根率

附图说明
18.图1为实施例1中实验组和对照组秋石斛植株的生长状态对比图,左图是对照组,右图为实验组

具体实施方式
19.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定

20.实施例121.一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法,包括如下步骤:
22.(1)
外植体的获取:取秋石斛健康母株枝条上的萌发新芽
(

1.5cm)
,带有3个节点,经无菌水清洗3次,置于
75
%的酒精中浸泡
5s
,取出无菌水清洗3次,置于
0.1
%升汞溶液中浸泡消毒
1min
,取出无菌水清洗3次,用消毒后的解剖刀切取茎尖作为外植体

23.(2)
丛生芽的诱导:将茎尖外植体接种到丛生芽诱导培养基
(
容器为
200ml
培养瓶
)
中,进行诱导培养

丛生芽诱导培养基的组成为:
ms 6-ba 3.0mg/l naa0.2mg/l ga30.4mg/l
蔗糖
30g/l
琼脂粉
5mg/l。
诱导培养条件为:
25℃
下培养
20d
,每天
16h
光照,
8h
黑暗,光照强度为
2000lx。
24.(3)
丛生芽的增殖:将诱导的丛生芽用无菌刀切割成小芽分别接种到丛生芽增殖培养基中
(
容器为培养瓶
)
进行增殖培养,得到丛生芽,增殖系数为
7.6。
丛生芽增殖培养基的组成为:
ms 6-ba2.0mg/l naa0.1mg/l
蔗糖
30g/l
琼脂
6g/l。
增殖培养条件为:
25℃
下培养
35d
,每天
16h
光照,
8h
黑暗,光照强度为
2000lx。
之后更换一次增殖培养基,继代培养1次,得到健壮的丛生芽

25.(4)
生根培养:将健壮的丛生芽用无菌导切割成单芽
(

2cm)
,接种于生根培养基
(
容器为培养袋,长
×
款=
20cm
×
15cm
,所述生根培养基装入组培袋后使用刮板进行整理,使粘附于组培袋侧壁上的生根培养基聚集到底部,这样可以在一定程度上降低污染率
)
上进行生根培养,在
25℃
下培养
60d
后,每天
12h
光照,
12h
黑暗,光照强度为
1500lx。
获得株高
8cm
的完整植株,且生根率为
100


生根培养基的组成为:
1/2ms
土豆粉
15g/l
成熟西红柿汁
5ml/l
花宝一号
1g/l
活性炭
0.5g/l naa5mg/l
蔗糖
10g/l
卡拉胶
6g/l。
土豆粉和花宝一号购自北京信达诚勤科技有限公司

26.在本发明中,由于丛生芽的诱导培养和增殖培养过程,外植体和丛生芽的体积较小,便于在培养瓶中操作,因此使用培养瓶是更好的选择,但是在进行生根培养时,丛生芽的高度已经达到
2cm
作用,将其接种于培养瓶时操作不便且容易弄伤植物组织增加污染的风险

因此,生根培养阶段本发明使用组培袋作为培养容器

在发明中所用培养基在使用前菌经过
121℃、15min
的高温消毒处理

27.同时,将上述步骤
(3)
得到的健壮丛生芽用无菌刀切割成单芽
(

2cm)
后,接种于对照生根培养基中,容器依然是培养袋,长
×
款=
20cm
×
15cm。
对照生根培养基的配方为:
1/2ms
土豆粉
15g/l
花宝一号
1g/l
活性炭
0.5g/l naa5mg/l
蔗糖
10g/l
卡拉胶
6g/l。
培养条件不变

28.统计二者的污染比例如表1所示

由表1可知,相对于对照生根培养基
(
对照组
30.75

)
本发明提供的生根培养基配方
(
实验组
11.50

)
能够显著降低秋石斛生根阶段植株的污染率

表明,本发明在生根培养基中添加成熟西红柿汁具有降低组培袋培养过程中植株污染率的作用

实验组和对照组典型的生长状态对比图如图1所示

29.表1污染率的统计结果
[0030][0031]
实施例2[0032]
对生根培养中的土豆粉用量对秋石斛生根率的影响进行研究,将实施例1步骤
(3)
中的生根培养基中的土豆粉用量改成
13g/l
,按照实施例1的方法和步骤进行诱导

增殖和生根培养,统计生根率

同时,将土豆粉替换成
10g/l

13g/l
的香蕉粉,也进行上述实验,统计生根率

结果如表2所示

[0033]
表2生根率的统计结果
[0034]
[0035][0036]
由表2可知,当土豆粉的用量由
15g/l
降至
13g/l
时,秋石斛的生根率受到了很大影响,生根率极显著下降
(t
测验,
p

0.001)
,而将土豆粉替换成不同浓度的香蕉粉后,秋石斛的生根率也受到了很大影响

这表明本发明提供的生根培养基中特定的组成和配比对于提高秋石斛生根率具有显著作用

[0037]
由以上实施例可知,本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法,并提供了一种适合组培袋培养的生根培养基,本发明通过在生根培养基中添加成熟西红柿汁和使用刮板整理组培袋中的生根培养基大大降低了秋石斛植株的污染率,且通过优化生根培养基的成分和用量提高了秋石斛植株的生根率

[0038]
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围

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