细胞培养方法-尊龙凯时官方app下载

文档序号:9353824阅读:542来源:国知局
细胞培养方法
【专利说明】细胞培养方法 相关申请的夺叉引用 本申请要求2013年3月14日提交的美国申请号13/829,292的权益,该申请的内容特 此以其全部内容结合在此。 发明领域 本发明总体上涉及细胞培养方法。 背景 治疗性多肽是一类重要的治疗性生物技术产品,并且治疗性抗体(包括鼠抗体、嵌合 抗体、人源化抗体和人抗体以及它们的片段)占据了治疗性生物产品的大多数。 概沭 在一个方面中,本发明的特征是一种产生具有目标值的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚 糖中的一种或多种的重组蛋白制剂的方法,该方法包括:(a)提供基因工程化来表达一种 重组蛋白的一种细胞;(b)在包含(例如,补充有)dmso的一种培养基中,在该细胞表达该 重组蛋白的条件下培养该细胞;并且(c)收获(例如,纯化或分离该细胞和/或培养基)由 该细胞产生的该重组蛋白的一种制剂,其中该制剂具有该目标值的高甘露糖聚糖和岩藻糖 基化聚糖中的一种或多种。在一些实施例中,该培养基包含dmso, dmso存在的时间和数量 能有效修改(例如,增加或减少)该重组蛋白中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一 种或多种。 在一些实施例中,该培养基包含至少约0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、 0.7%,0.8%,0.9%a%a.1%a.2%a.3%a.4:%a.5%a.6%a.7%a.8%a.9%,2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%或5%的dmso。在一些实施例中,该培养基包含约0. 1 %至5% 的dmso、约0. 1 %至约2 %的dmso、约0. 1 %至约1 %的dmso、约0. 5 %至约1 %的dmso、约 1 %至约1. 5%的dmso、约0? 5%至约1. 5%的dmso、约0? 6%至约1. 4%的dmso、约0? 7%至 约1. 3%的dmso、约0. 8%至约1. 2%的dmso、约0. 9%至约1. 1%的dmso、约1%至约2% 的dmso、约2 %至约3 %的dmso、约3 %至约4%的dmso、约4%至约5 %的dmso、约0. 1 %至 约2. 5%的dmso、约2. 5%至约5%的dmso、约0. 1 %至约2%的dmso、约0. 1 %至约3%的 dmso、约0. 1 %至约4%的dmso、约1 %至约5 %的dmso、约2 %至约5 %的dmso或约3 %至 约5%的dmso。 在一些实施例中,该目标值是一种参考治疗性产品中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化 聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该目标值是一种参考治疗性抗体产品 中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该 目标值是一个预先确定的药物产品规格或一种药物制剂的质量控制标准,例如分析证书 (cofa)、检测证书(coft)或主生产批记录(master batch record)。在一些实施例中,该产 品规格是fda标签、医嘱(physician' s insert)、usp专论或ep专论中的一个产品描述。 在一些实施例中,该参考治疗性产品选自下组,该组由以下各项组成:阿巴西普、阿昔 单抗、阿达木单抗、阿柏西普、阿法赛特、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、贝拉西普、赛妥 珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依那西普、吉姆单抗、替依莫单 抗、英利昔单抗、莫罗单抗-cd3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗;帕木单抗、雷珠单 抗、利洛西普、利妥昔单抗、托西莫单抗、以及群司珠单抗。 在一些实施例中,该目标值是以下各项中的一个或多个:(a)至少约0. 1 %至约20%高 甘露糖聚糖,例如,至少约〇. 1 %、约〇. 5%、约1 %、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约 7%、约 8%、约 9%、约 10%、约 11%、约 12%、约 13%、约 14%、约 15%、约 16%、约 17%、 约18%、约19%、约20%或更多的高甘露糖聚糖;以及(b)至少约70%至100%的岩藻糖 基化聚糖,例如,至少约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约100%的岩藻 糖基化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如hm3、hm4、hm5、hm6、hm7、hm8、hm9或它们的组合。 在一些实施例中,高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的目标值高于通过 在不包含dmso的培养基中培养该细胞产生的一种制剂中的相应水平。在一些实施例中,该 目标值比相应水平高该相应水平的至少约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、 90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。 在一些实施例中,该方法进一步包括评价该重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖和岩藻糖 基化聚糖中的一种或多种的水平。在一些实施例中,该方法进一步包括在印刷品或计算机 可读介质中,例如,在测试报告、材料安全数据表格(msds)、批记录、检测证书(coft)或分 析证书(cofa)中记录该水平。 在另一个方面中,本发明的特征是一种产生重组蛋白制剂的方法,该方法包括:(a)提 供一个目标值的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种;(b)提供基因工程化来 表达一种重组蛋白的一种细胞;(c)在包含(例如,补充有)dms0的一种培养基中,在该细 胞表达该重组蛋白的条件下培养该细胞;(d)收获由该细胞产生的该重组蛋白的一种制 剂;并且(e)如果该制剂满足高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的目标值, 将该制剂处理(例如,配制、填充到一个容器中、贴标签、包装中的一种或多种)成一种药物 产品。在一些实施例中,该培养基包含dmso, dms0存在的时间和数量能有效修改(例如,增 加或减少)该重组蛋白中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种。 在一些实施例中,该方法进一步包括评价该重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖和岩藻糖 基化聚糖中的一种或多种的水平。在一些实施例中,该方法进一步包括在印刷品或计算机 可读介质中,例如,在测试报告、材料安全数据表格(msds)、批记录、或检测证书(coft)或 分析证书(cofa)中记录该水平。 在一些实施例中,该培养基包含至少约0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、 0.7%,0.8%,0.9%a%a.1%a.2%a.3%a.4:%a.5%a.6%a.7%a.8%a.9%,2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%或5%的dmso。在一些实施例中,该培养基包含约0. 1 %至5%的dms0、约0. 1 %至约2 %的dms0、约0. 1 %至约1 %的dms0、约0. 5 %至约1 %的dms0、约 1%至约1. 5%的dms0、约0? 5%至约1. 5%的dms0、约0? 6%至约1. 4%的dms0、约0? 7%至 约1. 3%的dms0、约0. 8%至约1. 2%的dms0、约0. 9%至约1. 1%的dms0、约1%至约2% 的dmso、约2 %至约3 %的dmso、约3 %至约4%的dmso、约4%至约5 %的dmso、约0. 1 %至 约2. 5%的dms0、约2. 5%至约5%的dms0、约0. 1%至约2%的dms0、约0. 1%至约3%的 dms0、约0. 1 %至约4%的dms0、约1 %至约5 %的dms0、约2 %至约5 %的dms0或约3 %至 约 5%的 dms0。 在一些实施例中,该目标值是一种参考治疗性产品中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化 聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该目标值是一种参考治疗性抗体产品 中的高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该 目标值是一个预先确定的药物产品规格或一种药物制剂的质量控制标准,例如分析证书 (cofa)、检测证书(coft)或主生产批记录。在一些实施例中,该产品规格是fda标签、医嘱、 usp专论或ep专论中的一个产品描述。 在一些实施例中,该参考治疗性产品选自下组,该组由以下各项组成:阿巴西普、阿昔 单抗、阿达木单抗、阿柏西普、阿法赛特、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、贝拉西普、赛妥 珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依那西普、吉姆单抗、替依莫单 抗、英利昔单抗、莫罗单抗-cd3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗;帕木单抗、雷珠单 抗、利洛西普、利妥昔单抗、托西莫单抗、以及群司珠单抗。 在一些实施例中,该目标值是以下各项中的一个或多个:(a)至少约0. 1 %至约20%高 甘露糖聚糖,例如,至少约〇. 1 %、约〇. 5%、约1 %、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约 7%、约 8%、约 9%、约 10%、约 11%、约 12%、约 13%、约 14%、约 15%、约 16%、约 17%、 约18%、约19%、约20%或更多的高甘露糖聚糖;以及(b)至少约70%至100%的岩藻糖 基化聚糖,例如,至少约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约100%的岩藻 糖基化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如hm3、hm4、hm5、hm6、hm7、hm8、hm9或它们的组合。 在一些实施例中,高甘露糖聚糖和岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的目标值高于通过 在不包含dms0的培养基中培养该细胞产生的一种制剂中的相应水平。在一些实施例中,该 目标值比相应水平高该相应水平的至少约10 %、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。 在另一个方面中,本发明的特征是一种提高重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种的水平的方法,该方法包括:(a)提供基因工程 化来表达一种重组蛋白的一种细胞;(b)在包含(例如,补充有)dms0的一种培养基中,在 该细胞表达该重组蛋白的条件下培养该细胞;并且(c)收获由该细胞产生的该重组蛋白的 一种制剂,其中该制剂具有相对于通过在不包含dms0的培养基中培养该细胞产生的该重 组蛋白的一种制剂中的一个相应水平而言提高的水平的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及 3,3, 1,0,0聚糖中的一种或多种。在一些实施例中,该培养基包含dmso, dms0存在的时间 和数量能有效增加该重组蛋白中的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的 一种或多种。在一些实施例中,该方法进一步包括:如果该制剂满足高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一个或多种的一个目标值,将该制剂处理(例如,配制、填 充到一个容器中、贴标签、包装中的一种或多种)成一种药物产品。 在一些实施例中,该培养基包含至少约0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、0.7%,0.8%,0.9%a%a.1%a.2%a.3%a.4:%a.5%a.6%a.7%a.8%a.9%, 2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4.6%、4.7%、4.8%、4.9%或5%的01^0。在一些实施例中,该培养基包含约0.1%至5% 的dmso、约0. 1 %至约2 %的dmso、约0. 1 %至约1 %的dmso、约0. 5 %至约1 %的dmso、约 1%至约 1. 5% 的 dms0、约 0? 5%至约 1. 5% 的 dms0、约 0? 6%至约 1. 4% 的 dms0、约 0? 7%至 约1. 3%的dms0、约0. 8%至约1. 2%的dms0、约0. 9%至约1. 1%的dms0、约1%至约2% 的dms0、约2 %至约3 %的dms0、约3 %至约4%的dms0、约4%至约5 %的dms0、约0. 1 %至 约2. 5%的dms0、约2. 5%至约5%的dms0、约0. 1%至约2%的dms0、约0. 1%至约3%的 dms0、约0. 1 %至约4%的dms0、约1 %至约5 %的dms0、约2 %至约5 %的dms0或约3 %至 约 5%的 dms0。 在一些实施例中,该方法进一步包括测量该重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该方法进一步 包括在印刷品或计算机可读介质中,例如,在测试报告、材料安全数据表格(msds)、批记录、 检测证书(coft)或分析证书(cofa)中记录该水平。 在一些实施例中,高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种 的该提高的水平比相应水平高该相应水平的至少约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。在 一些实施例中,该提高的水平是以下各项中的一个或多个:(a)至少约0. 1 %至约20%高甘 露糖聚糖,例如,至少约〇. 1 %、约〇. 5%、约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约 7%、约 8%、约 9%、约 10%、约 11%、约 12%、约 13%、约 14%、约 15%、约 16%、约 17%、 约18 %、约19 %、约20%或更多的高甘露糖聚糖;(b)至少约70 %至100 %的岩藻糖基化 聚糖,例如,至少约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约100%的岩藻糖基 化聚糖;以及(c)至少约0. 1%至约90%的唾液酸化聚糖,例如,至少约20%、30%、40%、 50%、60%、70%、80%或90%的唾液酸化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如册3、圓4、册5、 hm6、hm7、hm8、hm9或它们的组合。 在另一个方面中,本发明的特征是一种降低重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种的水平的方法,该方法包括:(a)提供基因工程 化来表达一种重组蛋白的一种细胞;(b)在包含一个降低水平的dms0的一种培养基中,在 该细胞表达该重组蛋白的条件下培养该细胞;并且(c)收获由该细胞产生的该重组蛋白的 一种制剂,其中该制剂具有相对于通过在不包含该降低水平的dms0的培养基中培养该细 胞产生的该重组蛋白的一种制剂中的一个相应水平而言降低的水平的高甘露糖聚糖、唾液 酸化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种。在一些实施例中,该培养基包含该降低水 平的dmso, dms0存在的时间和数量能有效降低该重组蛋白中的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚 糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该方法进一步包括: 如果该制剂满足高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一个或多种的一个 目标值,将该制剂处理(例如,配制、填充到一个容器中、贴标签、包装中的一种或多种)成 一种药物产品。 在一些实施例中,该培养基包含小于约5%、4. 9%、4. 8%、4. 7%、4. 6%、4. 5%、4. 4%、 4. 3%、4. 2%、4. 1%、4%、3. 9%、3. 8%、3. 7%、3. 6%、3. 5%、3. 4%、3. 3%、3. 2%、3. 1%、 3%、2.9%、2.8%、2.7%、2.6%、2.5%、2.4%、2.3%、2.2%、2.1%、2%、1.9%、1.8%、 1. 7%、1. 6%、1. 5%、1. 4%、1. 3%、1. 2%、1. 1%、1%、0. 9%、0. 8%、0. 7%、0. 6%、0. 5%、 0? 4%、0. 3%、0. 2%、或 0? 1%、或 0%的 dmso。 在一些实施例中,该方法进一步包括测量该重组蛋白制剂中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种的一个水平。在一些实施例中,该方法进一步 包括在印刷品或计算机可读介质中,例如,在测试报告、材料安全数据表格(msds)、批记录、 检测证书(coft)或分析证书(cofa)中记录该水平。 在一些实施例中,高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1,0, 0聚糖中的一种或多种 的该降低的水平比相应水平低该相应水平的至少约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、95%或100%。在一些实施例中,该降低的水平是以下各项中的一个或多 个:(a)小于约20 %的高甘露糖聚糖;(b)小于约90 %的岩藻糖基化聚糖;以及(c)小于约 90%的唾液酸化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如册3、圓4、册5、圓6、册7、圓8、圓9或它们 的组合。 在另一个方面中,本发明的特征是一种降低重组蛋白制剂中的一种或多种岩藻糖基 化聚糖的水平的方法,该方法包括:(a)提供基因工程化来表达一种重组蛋白的一种细胞; (b)在包含(例如,补充有)dms0的一种培养基中,在该细胞表达该重组蛋白的条件下培养 该细胞;并且(c)收获由该细胞产生的该重组蛋白的一种制剂,其中该制剂具有相对于通 过在不包含dms0的培养基中培养该细胞产生的该重组蛋白的一种制剂中的一个相应水平 而言降低的水平的一种或多种岩藻糖基化聚糖。在一些实施例中,该培养基包含dms0,dms0 存在的时间和数量能有效降低该重组蛋白中的一种或多种岩藻糖基化聚糖的水平。在一些 实施例中,该方法进一步包括:如果该制剂满足一个或多种岩藻糖基化聚糖的一个目标值, 将该制剂处理(例如,配制、填充到一个容器中、贴标签、包装中的一种或多种)成一种药物 产品。 在一些实施例中,该培养基包含至少约0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、0.7%,0.8%,0.9%a%a.1%a.2%a.3%a.4:%a.5%a.6%a.7%a.8%a.9%, 2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4.6%、4.7%、4.8%、4.9%或5%的01^0。在一些实施例中,该培养基包含约0.1%至5% 的dmso、约0. 1 %至约2 %的dmso、约0. 1 %至约1 %的dmso、约0. 5 %至约1 %的dmso、约 1%至约 1. 5% 的 dms0、约 0? 5%至约 1. 5% 的 dms0、约 0? 6%至约 1. 4% 的 dms0、约 0? 7%至 约1. 3%的dms0、约0. 8%至约1. 2%的dms0、约0. 9%至约1. 1%
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