一种旋转式细胞磁分离方法-尊龙凯时官方app下载

文档序号:9212591阅读:363来源:国知局
一种旋转式细胞磁分离方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种细胞分离方法,尤其是一种旋转式细胞磁分离方法。
【背景技术】
[0002]细胞磁分离技术是借助偶联在磁性微粒上抗体高特异性识别并标记目标细胞表面抗原,再利用磁场的力量筛选磁珠的方式,将未结合磁珠的细胞除去,得到纯化的目标细胞,是一种细胞分选和富集的常用技术。
[0003]目前广泛应用的细胞磁分离产品为磁力分离架,这是一种定制的强力磁铁,将标记有磁珠的细胞悬液贴合在磁铁表面,然后静止一段相当长的时间(5-10分钟),与磁珠结合的细胞就会被吸附在磁铁的侧壁上,之后通过倾倒的方式或者利用移液器去除清液,留下来的就是需要分离的目标细胞。市场上常见的磁力分离架产品有stemcell公司的 easysep? magnet, life technologies 公司的 dynlmag?,merck millipore 公司的pureproteome? magnetic stand, promega 公司的 magnespheretm magnetic separat1nstand 等。
[0004]各个公司生产的磁力分离架虽然在外形和磁场强弱方式上各有不同,但是工作方式都是依靠磁场的静态吸附能力,导致细胞分离时间较长,一般都在5-10分钟甚至更长。而且分离时间越短,所采用的磁场强度就相对越高,就会对细胞造成越大损伤。

【发明内容】

[0005]本发明所要解决的技术问题是,提供一种分离效率高、时间短、磁场强度低的旋转式细胞磁分离方法。
[0006]为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种旋转式细胞磁分离方法,包括以下步骤:
[0007]步骤1,样品放入:将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入试管,然后将试管插入环形磁铁中间;
[0008]步骤2,旋转分离:使试管围绕环形磁铁中轴线按一定方式旋转,一段时间以后,旋转停止;
[0009]步骤3,静止分离:保持静止,并保持一段时间;
[0010]步骤4,细胞收集:将上清液移出。
[0011]所述步骤i中环形磁铁中心处磁场强度为500_950mt。
[0012]所述步骤2中以一定方式旋转是指采用匀速旋转方式,转速为0.1转/s-10转/s,旋转1-2分钟。
[0013]所述步骤2中以一定方式旋转是指采用恒定角加速度加速方式旋转,角加速度为0.lrad/s2,最大转速为10转/s,旋转1_2分钟。
[0014]所述步骤3中静止时间为2-5分钟。
[0015]所述步骤4中用移液或者倒出的方式将上清液移出。
[0016]本发明的有益效果是:通过让装有细胞与磁珠悬浊液的试管在环形磁铁中旋转的方式,使磁珠在离心力的作用下向远离轴心的方向运动,磁珠距离环形磁铁的距离变近。越靠近环形磁铁的地方磁场强度越高,磁珠被吸附的力量越大。然后经过静止分离阶段,使磁珠被稳定吸附在磁铁附近。通过这种方式,可以极大的减小分选时间,提高分选效率。同时降低对磁场强度的要求,由于磁场强度越大,对细胞的损伤越大,所以可以有效的减少对细胞的损伤。
【附图说明】
[0017]图1是本发明的旋转式细胞磁分离方法的示意图。
【具体实施方式】
[0018]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明:
[0019]如图1所示,图中i是环形磁铁,2是试管。
[0020]本发明的旋转式细胞磁分离方法,包括以下步骤:
[0021]步骤1,样品放入:将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入试管2,然后将试管插入环形磁铁i中间;
[0022]步骤2,旋转分离:使试管2围绕环形磁铁i中轴线按一定方式旋转,一段时间以后,旋转停止;
[0023]步骤3,静止分离:保持静止,并保持一段时间;
[0024]步骤4,细胞收集:将上清液移出。
[0025]所述步骤i中环形磁铁中心处磁场强度为500_950mt。
[0026]所述步骤2中以一定方式旋转是指采用匀速旋转方式,转速为0.1转/s-10转/s,旋转1-2分钟。
[0027]所述步骤2中以一定方式旋转是指采用恒定角加速度加速方式旋转,角加速度为0.lrad/s2,最大转速为10转/s,旋转1_2分钟。
[0028]所述步骤3中静止时间为2-5分钟。
[0029]所述步骤4中用移液或者倒出的方式将上清液移出。
[0030]以分离⑶3 细胞为例,本发明试管2的型号为bd公司的falcon 15ml聚苯乙烯圆底管,外径18mm,高度95mm。环形磁铁i由汝铁硼制成,磁力线方向在圆孔内沿垂直于轴线的方向分布,越靠近表面的地方,磁场强度越大。环形磁铁i的大小为内径18_,外径55mm,高度60mm。环形磁铁i中心处磁场强度为900mt。环形磁铁i的磁力线方向在圆孔内沿垂直于轴线的方向分布,越靠近表面的地方,磁场强度越大。
[0031]本发明的细胞磁分离方法包括以下步骤:
[0032]步骤1:样品放入;将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入试管i,然后将试管2插入环形磁铁i中间;
[0033]步骤2:旋转分离;使试管2围绕环形磁铁i中轴线按一定方式旋转,并保持一段时间;旋转方式在本实施例中采用匀速转动方式,转速为i转/s,也可以采用恒定角加速度加速方式旋转。旋转时间为2分钟。
[0034]步骤3:静止分离;停止试管2的旋转,保持静止,并保持一段时间;在本实施例中静止时间为3分钟。
[0035]步骤4:细胞收集;用移液或者倒出的方式将上清液移出;
[0036]移液后,剩余在样杯内的就是分选后的细胞。经流式细胞仪验证,分选出的细胞比例为95.1%。当试管不旋转时,在其他条件均相同的情况下,静止5分钟分选出的细胞比例为84.1 %。这就证明了通过这种方法,与传统直接静止的方法相比,可以极大提高分选效率。在分选比例要求不变的情况下,可以通过较少分选时间或者降低磁场强度的方式,实现细胞分选。由于磁场强度越大,对细胞的损伤越大,所以减少磁场强度可以有效的减少对细胞的损伤。
[0037]以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点,其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本发明的内容并据以实施,不能仅以本实施例来限定本发明的专利范围,即凡本发明所揭示的精神所作的同等变化或修饰,仍落在本发明的专利范围内。
【主权项】
1.一种旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1,样品放入:将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入试管(2),然后将试管(2)插入环形磁铁(i)中间; 步骤2,旋转分离:使试管(2)围绕环形磁铁(i)中轴线按一定方式旋转,一段时间以后,旋转停止; 步骤3,静止分离:保持静止,并保持一段时间; 步骤4,细胞收集:将上清液移出。2.根据权利要求1所述的旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,所述步骤i中环形磁铁(i)中心处磁场强度为500-950mt。3.根据权利要求1或2所述的旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,所述步骤2中以一定方式旋转是指采用匀速旋转方式,转速为0.1转/s-?ο转/s,旋转1-2分钟。4.根据权利要求1或2所述的旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,所述步骤2中以一定方式旋转是指采用恒定角加速度加速方式旋转,角加速度为0.lrad/s2,最大转速为10转/s,旋转1-2分钟。5.根据权利要求1或2所述的旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,所述步骤3中静止时间为2-5分钟。6.根据权利要求1所述的旋转式细胞磁分离方法,其特征在于,所述步骤4中用移液或者倒出的方式将上清液移出。
【专利摘要】本发明公开了一种旋转式细胞磁分离方法,包括样品放入、旋转分离、静止分离和细胞收集四个步骤。本发明通过让装有细胞与磁珠悬浊液的试管在环形磁铁中旋转的方式,使磁珠在离心力的作用下向远离轴心的方向运动,磁珠距离环形磁铁的距离变近。越靠近环形磁铁的地方磁场强度越高,磁珠被吸附的力量越大。然后经过静止分离阶段,使磁珠被稳定吸附在磁铁附近。通过这种方式,可以极大的减小分选时间,提高分选效率,以及有效的减少对细胞的损伤。
【ipc分类】c12n5/00, c12n13/00
【公开号】cn104928280
【申请号】cn201510369536
【发明人】刘晓华, 孙雪莲, 朱建民, 李召雨, 刘江, 周洪锐, 田建国, 叶青, 梅剑春, 黄慧玲, 李洲
【申请人】关节动力安达(天津)生物科技有限公司, 天津中新科炬生物制药有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月26日
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