尿液肝素辅助因子的制作方法-尊龙凯时官方app下载

文档序号:36265748发布日期:2023-12-06 09:18阅读:1来源:国知局
尿液肝素辅助因子的制作方法
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);或由
seq id no:1
所示的氨基酸序列衍生的,且与
seq id no:1
所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列

6.优选地,所述制剂为
sle
患者尿液肝素辅助因子
ii
及其多肽片段检测试剂盒

7.优选地,所述试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合肝素辅助因子
ii
及其多肽片段的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种

8.优选地,所述检测方法包括直接检测肝素辅助因子
ii
及其多肽片段的质谱等方法及其相关试剂盒

9.优选地,所述检测方法包括直接检测肝素辅助因子
ii
及其多肽片段的相关核酸检测等方法及其相关试剂盒

10.优选地,所述试剂盒还包括选自下组的成分:固相载体,稀释液,对照品,标准品,质控品,检测抗体,第二抗体

第二抗体稀释液,发光试剂,洗涤液

显色液

终止液中的任意一种或几种的组合

11.优选地,所述标准品包括肝素辅助因子
ii
标准品

人源化标签抗体标准品;较佳地,所述质控品包括:肝素辅助因子
ii
质控品

人源化标签抗体质控品;较佳地,所述固相载体包括:微粒

微球

玻片

试纸条

塑料珠

液相芯片

微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体

12.优选地,所述固相载体的材质为聚氯乙烯

聚苯乙烯

聚丙酰胺

纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体

13.发明人首先收集了健康人
、sle
活动期患者(
asle
)和稳定期患者(
ssle
)的尿液标本,
4000r/min
离心
5min
后,吸取上清,采用
bradford
法测定提取的蛋白浓度,进行
sds-page
酶解

尿液样本的
label-free
质谱分析由
orbitrapfusion
型质谱完成


sle
组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算

以蛋白表达量差异在
1.5
倍以上且经统计检验
p《0.05
作为参考标准筛选差异性多肽

然后发明人对具有统计学意义的差异性多肽进行鉴定,利用数据库检索得到差异蛋白肝素辅助因子
ii。
发明人利用
western blot
免疫印迹试验对
sle
患者和健康人尿液中的肝素辅助因子
ii
及其含量进行了验证

14.本发明通过研究证实肝素辅助因子
ii
及其多肽片段在
sle
活动期患者的尿液中呈高表达,与临床诊断有较好的一致性

从而提出检测尿液肝素辅助因子
ii
及其多肽片段可用于
sle
的辅助诊断或病情监测

15.本发明发挥尿液标本获取无创

可大规模重复取样

保存方便的优势,利用尿液标本检测尿液肝素辅助因子
ii
及其多肽片段

16.为让本发明的上述和其它目的

特征和优点能更明显易懂,下文特举较佳实施例,并配合附图,作详细说明如下

附图说明
17.图1是尿液肝素辅助因子
ii
及其多肽片段在
sle
患者及健康对照组中含量图

18.图2是尿液肝素辅助因子
ii
及其多肽片段在
sle
患者及健康对照组中
western blot
免疫印迹试验结果图

具体实施方式
19.实施例1ꢀꢀ
尿液标本的收集与处理选取
sle
患者作为
sle
组,选取同期健康体检者作为正常对照组

收集各组研究对象入院后的新鲜晨尿样本
30ml
,不能正常排尿者收集其早晨导尿管中尿液,置于干燥

洁净的容器内

将收集的尿液标本
4000r/min
离心
5min
后,吸取上清,每管
2ml
分装,-80℃
冰箱保存

20.实施例2ꢀꢀ
质谱分析和尿液多肽的筛选对尿液样品蛋白提取,并对提取的蛋白浓度进行测定

尿液样本的质谱分析由
orbitrapfusion
型质谱完成

将实验组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算

组间比较采用
t-test
进行差异分析,以蛋白表达量差异在
1.5
倍以上且经统计检验
p《0.05
作为参考标准筛选差异表达蛋白

21.实施例3ꢀꢀ
差异多肽的鉴定及分析使用的数据库为
uniprot_homo
数据库,产生的质谱原始文件采用
maxquant
软件处理,检索参数设置见表
1。
22.实施例4ꢀꢀ
尿液肝素辅助因子
ii
的验证 label-free
质谱分析结果显示肝素辅助因子
ii

sle
活动期患者的尿液中高表达,其在
sle
患者及健康对照组尿液中的含量如图1所示,使用
western blot
免疫印迹试验对
sle
患者和健康人尿液中的肝素辅助因子
ii
进行检测,结果如图2所示

肝素辅助因子
ii
在各组间表达具有显著性差异

23.虽然本发明已以较佳实施例披露如上,然其并非用以限定本发明,任何所属技术领域的技术人员,在不脱离本发明的精神和范围内,当可作些许的更动与改进,因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准

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